抗体序列在抗体验证中的重要性

抗体作为蛋白质的重要类别，其氨基酸序列可以直接影响抗体的性质，许多研究表明，当抗体的氨基酸序列发生变化后，其对靶蛋白的识别能力，亲和力，及在细胞内的半衰期均有可能受到影响。而这种变化在许多情况下不可避免，例如，抗体的制备一般需要动物免疫和杂交瘤细胞培养，这些流程都有一定的出错率；在细胞系中，抗体基因在复制、转录、翻译及翻译后会出现各种错误，造成抗体序列的变化，导致抗体特性的改变甚至丧失。

在进行抗体验证或鉴定时，人们往往更加侧重于抗体特异性的测试，而忽视抗体序列的重要性，研究人员通常采用免疫组化、免疫印迹（Western Blot）和ELISA等方法测试抗体与靶蛋白的结合，然而，这些测试虽然能够间接地检测出脱靶问题，却无法深入地了解抗体本身的序列变化以及产生额外表达链的可能。

抗体中的额外链先前被认为是没有任何功能的，然而最近有研究表明，这些额外链的产生会干扰实验，并导致交叉反应问题，在这项研究中，研究者随机分析了 185 个杂交瘤细胞的测序数据，他们发现，除了细胞本应表达的单克隆抗体之外，这些杂交瘤细胞中有 32% 还表达了额外的功能性轻链和重链，这些额外链基因的表达降低了目标抗体的特性，包括特异性，结合信号以及信噪比。因此，在实际研究中，了解抗体的序列信息至关重要。同时，在快序生物过去数千例抗体测序的经验中，我们同样注意到纯化抗体样品中存在额外链的情况十分常见，因此，我们对80个抗体蛋白样品进行了分析，在其中的11个样品中检测到了额外的轻链，占总样品的14%（图1）。

图1.对80个抗体样品进行了测序分析，在14%的样品中检测到额外的轻链。

由上可知，在抗体验证中，测试抗体的特异性和一致性同等重要，二者兼施才能保证准确性。传统的测试抗体一致性的方法有肽图分析、液相色谱及基因测序，而这些技术均有局限性，肽图分析无法达到较高的序列覆盖率，往往需要进行多次；液相色谱仅能提供有限的抗体结构信息；基于核苷酸的测序则无法得到翻译后修饰 (PTM)的重要信息。

快序生物的抗体蛋白测序技术弥补了传统抗体验证方法的种种不足，抗体蛋白测序直接针对抗体蛋白进行从头测序，无需细胞系，无需DNA，结合高精度、高分辨率的质谱设备，以及自主研发的抗体蛋白测序平台，可以快速地确定抗体的全长序列，准确地发现基因突变，片段缺失，额外表达链，以及翻译后修饰信息。结合快序生物的抗体蛋白测序和常规的特异性检测（图2），科研人员可全面地对抗体的序列和功能进行鉴定，以保证抗体的质量和实验的成功。

图2.结合特异性和一致性检测的抗体验证思路，其中，抗体蛋白测序可确认抗体序列信息，是抗体一致性检测有效直接的手段。

参考文献：

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