抗体验证策略

为什么需要抗体验证？

抗体是科学研究和医药研发中最广泛使用和不可或缺的工具，而在抗体的制备，生产，和保存过程中，许多因素会影响到抗体的稳定性和一致性（例如杂交瘤细胞死亡或变异，或抗体生产的批次间差异），导致其特异性发生变化，造成实验无法重复，因此，为了确保研究及治疗的可重复性，进行抗体验证十分必要。

如何进行抗体验证？

抗体验证一般从鉴定抗体的特异性和一致性两方面入手。 特异性是指抗体识别靶蛋白的能力，以及与靶蛋白的结合强度或亲和力；抗体一致性则要求使用不同批次的同一抗体时能获得相同的结果，即可重复性，抗体一致性也可通过抗体的序列保持不变来体现。

特异性测试

抗体验证中的特异性测试有多种方式：

1. 基因策略：利用CRISPR/Cas或RNA干扰（RNAi）等技术，将对照细胞或组织中的目标基因敲除或敲低，然后使用特异性抗体测定目标蛋白的荧光信号。

2. 正交策略：分别使用不依赖于抗体的方法（质谱法），和基于抗体的方法（免疫印迹，Western blot）对样品进行定量，然后比较两种定量间的相关性。

3. 独立抗体策略：使用识别相同目标蛋白表面不同抗原表位的2种或多种独立抗体，并通过对比或定量分析确定特异性。

4. 标签蛋白表达：为内源性目标基因添加亲和标签或荧光蛋白标签，分别使用识别标签与识别目标蛋白的抗体进行检测，对来自标签蛋白的信号进行校正。

5. 免疫捕获及质谱分析IMS：首先免疫沉淀（IP）技术通过使用与目标蛋白特异性结合的抗体分离出来目标蛋白，然后经过质谱分析，鉴定识别与抗体直接发生相互作用的目标蛋白以及目标蛋白-抗体复合物。

一致性（可重复性）测试

抗体的一致性测试有以下方式：

1. 使用表面等离子共振、免疫共沉淀等技术检测抗体是否与目标蛋白发生结合。

2. 通过抗体蛋白测序、肽图分析、液相色谱或基因测序来检测抗体序列是否保持不变。

其中，抗体蛋白测序是一种最直接有效的测序方法，该技术通过质谱学的手段直接对抗体蛋白样品进行序列分析，得到全长序列，研究人员可以使用它来代替传统的肽图分析和基因测序，更加快速且经济地验证抗体序列。

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